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耗材專區(qū) | Empore? C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應用

2025-04-11

前言
在蛋白質(zhì)組學研究中，C18 96孔板被廣泛應用于肽段脫鹽和純化步驟，尤其適用于高通量樣本處理，為下游質(zhì)譜分析提供高質(zhì)量樣本。


01


Empore? C18 96孔板簡介


Empore? C18膜式固相萃取96孔板專為高通量固相萃取而設計，板的每個孔內(nèi)都有一個有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜，固相萃取膜和其上方的預過濾層被壓環(huán)固定到每個孔的底部，預過濾層可有效提高大多數(shù)生物樣品前處理流速。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實際使用直徑。標準板的單孔儲液體積為1.2mL，深孔板的單孔儲液體積為2.5mL。如果樣品或試劑的體積超過板的單孔儲液體積，可分批次加液。

02


Empore? C18 96孔板技術優(yōu)勢


  • 高通量、低樣本損失、兼容自動化設備。
  • 致密且穩(wěn)定的膜結(jié)構消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問題，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更高。
  • 薄薄的膜結(jié)構更易被洗脫，回收率更高。

03


C18 96孔板脫鹽原理


C18鍵合相（十八烷基硅烷）通過疏水相互作用吸附肽段，去除鹽分、去垢劑等雜質(zhì)，隨后用有機溶劑洗脫肽段，實現(xiàn)脫鹽和濃縮。

04


實驗前準備


1、材料與試劑
  • CDS Empore? C18 96孔板（貨號：70-2007-3982-2EA，規(guī)格：6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS）

  • 緩沖液：

活化/平衡液：0.1%三氟乙酸（TFA）水溶液;

洗滌液：0.1% TFA/5%乙腈（ACN）;

洗脫液：0.1% TFA/50-80% ACN（或70% ACN/0.1%甲酸）。
  • 真空抽濾裝置或離心機（適配96孔板）
  • 肽段樣本（酶解后的復雜混合物）

2、板預處理

  • 活化：每孔加入200μL 100% ACN，靜置1分鐘，抽干。

  • 平衡：每孔加入200μL 0.1% TFA，重復2次，確保填料親水化。

05


脫鹽步驟


1、上樣
  • 將肽段樣本（溶于0.1% TFA）加入孔中。
  • 注意：樣本pH需≤3（TFA調(diào)節(jié)），以增強肽段與C18的結(jié)合。
2、洗滌
  • 每孔加入200μL洗滌液（0.1% TFA/5% ACN），重復2-3次，去除鹽分和極性雜質(zhì)。
  • 真空抽干或離心徹底去除液體。
3、洗脫
  • 加入50-100μL洗脫液（如0.1% TFA/50% ACN），靜置1分鐘，收集洗脫液至收集板。
  • 可重復洗脫1次以提高回收率。
4、干燥
  • 合并洗脫液，真空離心干燥（如SpeedVac）后溶于質(zhì)譜上樣緩沖液（如0.1%甲酸）。

06


關鍵參數(shù)優(yōu)化


1、流速控制
  • 手動操作時避免流速過快（依賴重力或離心）；自動化平臺可調(diào)至1mL/ min。
2、有機相比例
  • 洗脫ACN濃度需優(yōu)化（通常50-80%），過高可能導致疏水性雜質(zhì)共洗脫。
3、樣本載量
  • 避免超載（肽段載量：100μg左右/孔），否則會導致回收率低。

07


應用場景


1、質(zhì)譜前處理
  • 去除LC-MS/MS樣本中的鹽（如SDS、尿素、磷酸鹽）。
2、分級洗脫
  • 與高pH反相分餾聯(lián)用，提高肽段覆蓋度。
3、自動化整合
  • 適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan、Hamil-ton) 實現(xiàn)高通量。



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