圖像法細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析儀，基本都是先拍攝得到細(xì)胞照片，然后把照片中的每個(gè)細(xì)胞通過(guò)設(shè)定好的識(shí)別參數(shù)進(jìn)行分析標(biāo)記，由軟件統(tǒng)計(jì)死活細(xì)胞數(shù)并計(jì)算得到細(xì)胞密度和活率。

在此過(guò)程中，細(xì)胞識(shí)別參數(shù)給分析軟件提供了標(biāo)準(zhǔn)，幫助判斷哪些是細(xì)胞和哪些是活細(xì)胞，從而讓我們看到了常見(jiàn)的綠色和紅色標(biāo)記的細(xì)胞照片（如下右圖所示）。

細(xì)胞識(shí)別參數(shù)設(shè)置不同會(huì)有何影響？

同樣的一張細(xì)胞照片，細(xì)胞識(shí)別參數(shù)設(shè)置不同會(huì)讓我們得到如下不同的照片和分析結(jié)果。

從左到右為第1、第2和第3種不同細(xì)胞識(shí)別參數(shù)下分析得到的照片

以上3張照片中綠色標(biāo)記是活細(xì)胞，紅色標(biāo)記是死細(xì)胞，藍(lán)色標(biāo)記是非細(xì)胞顆粒。第1種細(xì)胞識(shí)別的照片中不少細(xì)胞被標(biāo)記為了藍(lán)色，所以總細(xì)胞密度只有4.18 x 106 /mL。第2種細(xì)胞識(shí)別的照片中活細(xì)胞很多都標(biāo)記為了紅色，所以雖然總細(xì)胞密度沒(méi)問(wèn)題，但活細(xì)胞密度減少到了4.70 x 106 /mL，相應(yīng)的細(xì)胞活率下降到了82.3%。而第3種細(xì)胞識(shí)別參數(shù)得到了比較準(zhǔn)確的分析結(jié)果，照片中的細(xì)胞都準(zhǔn)確地進(jìn)行了分析。

由此可見(jiàn)，細(xì)胞識(shí)別參數(shù)對(duì)圖像法細(xì)胞計(jì)數(shù)儀很重要，設(shè)置不合適將會(huì)直接導(dǎo)致分析結(jié)果錯(cuò)誤。

細(xì)胞識(shí)別參數(shù)的設(shè)置和優(yōu)化，如何實(shí)現(xiàn)事半功倍的效果？

首先我們需要了解圖像法細(xì)胞計(jì)數(shù)儀軟件中的識(shí)別參數(shù)。

譬如Vi-CELL BLU軟件中包含Minimum diameter, Maximum diameter, Cell sharpness, Min circularity, Decluster degree等參數(shù)（如下圖所示），我們可以在操作手冊(cè)中查到這些參數(shù)相應(yīng)的定義。根據(jù)這些定義做出調(diào)大或調(diào)小的設(shè)置，可以比較修改前后的識(shí)別效果，最 終讓照片中的細(xì)胞都被正確標(biāo)記。

然后我們可以看下軟件是否有數(shù)據(jù)再分析功能。

細(xì)胞識(shí)別參數(shù)的設(shè)置和優(yōu)化，需要結(jié)合軟件數(shù)據(jù)再分析功能，不然勢(shì)必會(huì)導(dǎo)致勞而少功的結(jié)局。

試想一下，當(dāng)我們的樣品測(cè)試完后發(fā)現(xiàn)使用的識(shí)別參數(shù)不合適，此時(shí)軟件沒(méi)有數(shù)據(jù)再分析功能，只能通過(guò)重新上樣檢測(cè)以判斷優(yōu)化后的參數(shù)設(shè)置是否合適。這種操作勢(shì)必要用掉不少樣品和浪費(fèi)操作人員的寶貴時(shí)間。

反之，如果我們可以通過(guò)數(shù)據(jù)再分析功能直接對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行參數(shù)的優(yōu)化設(shè)置，就不需要再次上樣檢測(cè)，可以大大提高參數(shù)優(yōu)化的效率。

如下所示是Vi-CELL BLU已測(cè)試數(shù)據(jù)的再分析操作界面，從左到右分別是細(xì)胞識(shí)別參數(shù)、分析結(jié)果和拍攝的細(xì)胞照片，操作人員可以在同一界面上完成參數(shù)優(yōu)化后的實(shí)時(shí)再分析結(jié)果顯示功能。

最 后我們查看下分析軟件是否可以顯示單個(gè)細(xì)胞的識(shí)別參數(shù)。

當(dāng)我們檢查拍攝的細(xì)胞識(shí)別照片時(shí)，若發(fā)現(xiàn)有異常未識(shí)別到的細(xì)胞，可以直接選中該細(xì)胞查看對(duì)應(yīng)的識(shí)別參數(shù)，即單個(gè)細(xì)胞的識(shí)別參數(shù)顯示功能。以Vi-CELL BLU為例，如下左圖可以看到有1個(gè)大顆粒標(biāo)記為了藍(lán)色（方框內(nèi)顆粒），經(jīng)過(guò)操作人員的辨識(shí)，該顆粒也是所需的活細(xì)胞。那我們就可以點(diǎn)擊選中該細(xì)胞，查看顯示的識(shí)別參數(shù)（如下左圖中的數(shù)據(jù)）。

然后，對(duì)照使用的細(xì)胞識(shí)別參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)（Cell Type）中的參數(shù)。發(fā)現(xiàn)其中Maximum diameter設(shè)置是25um，而該細(xì)胞的直徑是25.43um，所以該細(xì)胞標(biāo)記為非細(xì)胞顆粒。那么，通過(guò)把Cell Type中Maximum diameter從25um改為50um，即可將該細(xì)胞識(shí)別為我們期望的活細(xì)胞（如上右圖）。

所以，分析軟件若具有對(duì)每個(gè)細(xì)胞的識(shí)別參數(shù)顯示功能，那么結(jié)合數(shù)據(jù)再分析功能，將會(huì)使得細(xì)胞參數(shù)的優(yōu)化過(guò)程由繁瑣轉(zhuǎn)為更加地簡(jiǎn)便。

綜上所述，細(xì)胞識(shí)別參數(shù)對(duì)于圖像法細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)細(xì)胞密度和活率非常重要，只有設(shè)置合適的參數(shù)才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。但要設(shè)置合適的識(shí)別參數(shù)有時(shí)并不容易，需要我們對(duì)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，而這需要我們了解每個(gè)識(shí)別參數(shù)的定義，并且通過(guò)數(shù)據(jù)再分析功能結(jié)合單個(gè)細(xì)胞的識(shí)別參數(shù)顯示功能，從而可以更便捷地完成整個(gè)細(xì)胞識(shí)別參數(shù)的優(yōu)化過(guò)程。

最 后，如果您是我們Vi-CELL BLU的用戶，目前遇到細(xì)胞識(shí)別參數(shù)優(yōu)化的問(wèn)題，可以聯(lián)系我們的當(dāng)?shù)劁N售或工程師，我們有《Vi-CELL BLU細(xì)胞識(shí)別參數(shù)的設(shè)置和優(yōu)化》應(yīng)用手冊(cè)可以作為指南幫您順利完成識(shí)別參數(shù)的優(yōu)化操作。