生物樣品分離技術(shù)--鹽析法
鹽析法
利用不同蛋白質(zhì)在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來(lái)沉淀除去蛋白質(zhì)。在低鹽濃度下,蛋白質(zhì)溶解度隨著鹽濃度的升高而增加,稱(chēng)為鹽溶作用。當(dāng)鹽濃度不斷升高時(shí),不同蛋白質(zhì)的溶解度又以不同程度下降,并先后析出沉淀,稱(chēng)為鹽析作用。這是由蛋白質(zhì)分子內(nèi)及分子間電荷的極性基團(tuán)的靜電引力造成的。由于水中加入了少量的鹽,增加了溶液的極性,減弱了蛋白質(zhì)分子間的作用力,促使其溶解度增大。當(dāng)鹽濃度增加到一定程度時(shí),水活度被降低,蛋白質(zhì)表面的電荷大量被中和,水化膜被破壞,白質(zhì)分子又相互聚集沉淀析出鹽析法的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)設(shè)備和條件要求低,安全,應(yīng)用范圍廣泛,一般可在室溫下操作常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。硫酸銨的鹽析能力強(qiáng),飽和液濃度大,溶解度受溫度影響小,一般不會(huì)使蛋白質(zhì)變性。缺點(diǎn)是緩沖能力差,pH值常在4.5～5.5。
鹽析時(shí)要注意以下幾個(gè)問(wèn)題。
①鹽的飽和度影響? ?鹽的飽和度是影響蛋白質(zhì)鹽析的重要因素,不同的蛋白質(zhì)鹽析所要求的飽和度不同。
②pH值的選擇? ?蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)(pI)時(shí)的溶解度最小,最易從溶液中沉淀析出,因此進(jìn)行鹽析時(shí)的pH值要選擇在被沉淀蛋白質(zhì)的pI附近。
③蛋白質(zhì)濃度的影響? ?在相同鹽析條件下蛋白質(zhì)濃度越大,越易沉淀。
④溫度的影響? ?一般可在室溫下進(jìn)行。
