聚丙烯酰氨凝膠電泳的實驗結(jié)果分析
1、電泳條件的選擇
為了選擇血清蛋白電泳較合適的條件,我們分別對單體濃度、雙體濃度、配制凝膠時所用不同正離子、各種電壓、二甲氨基丙腈的濃度、過硫酸銨的濃度等條件進行了試驗。根據(jù)以上試驗結(jié)果,我們在分離血清蛋白時選用的條件是:單體濃度6.25-6.5%,雙體占總丙烯酰胺量的4-5%,正離子采用三羥甲基氨基甲烷,二甲氨基丙腈及過硫酸銨濃度分別為0.25%及0.7%。電泳電壓以7-10V/cm較為合適。但電泳時間較長,約2-3小時,室溫低時可以電壓稍高。如果室溫較高則可以在冰箱中進行電泳。
2、人血清及其酒精分劃部分的凝膠電泳
采用上述條件我們進行了正常人血清的凝膠電泳。一般可以分成15-20條區(qū)帶。根據(jù)兩向電泳方法比較了紙電泳和凝膠電泳各區(qū)帶的相對關(guān)系。紙電泳上的a:區(qū)帶在凝膠電泳中可被分離成10條以上區(qū)帶。但紙電泳中d,區(qū)帶的一部分則與凝膠電泳中自蛋白區(qū)帶相重合。在正常人血清中后白蛋白(PA)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tr)和觸珠蛋白(HP)均有不同的型。較純晦白蛋白和丙種球蛋白部分,在凝膠電泳中可見明顯的其他蛋白區(qū)帶。
3、放射病狗血清蛋白電泳的觀察
放射病動物血清蛋白的改變可以在紙電泳中觀察到。一般認(rèn)為狗在照射后吻球蛋白有增高。用凝膠電泳觀察可以得到更深入的資料。正常狗血清的凝膠電泳圖譜大致人相似。狗受致死量照射后第九天有明顯變化。我們用3-10型光 譜儀用光密度計將電泳圖譜進行了掃描。由于儀器的限制光縫最小只能達到0.5mm,從而影響了其分辨力。但與正常血清對比可以見到其改變的情況,這遠比紙電泳中所見更為明顯。
4、在分離正常人尿DNase時的凝膠電泳
觀察用葡聚糖凝膠分離人尿中DNase時可以除去大部分其他蛋白質(zhì)和雜質(zhì)。但分離所得的制品用凝膠電泳觀察還可以見到五條以上的蛋白質(zhì)區(qū)帶。將凝膠條在未染色前置于含大分子DNA的瓊脂平板上,在37℃溫箱中保溫2-3小時,再用5%三氯醋酸加至如此處理過的瓊脂板上,可以看到乳白色本底上出現(xiàn)被酶水解后的透明斑點。將凝膠條用氨黑染色后顯示其蛋白區(qū)帶的位置。二者比較就可以確定具有酶活性的成分的相應(yīng)電泳位置。我們的試驗中觀察到人尿DNase在凝膠電泳中至少被分離成二條以上有酶活性的區(qū)帶。說明有同功酶的可能。應(yīng)用這一方法可以較深人地觀察體液中酶的情況。同時也說明可以用凝膠電泳來指示生物制劑制備過程中純化的情況。