1、生物樣本保存應(yīng)該在什么樣的溫度條件下?

　　生物樣本的保存溫度與樣本的處理方式、樣本特性、用途和保存時間直接相關(guān)，但科學(xué)界統(tǒng)一的共識是，如要長期保持生物樣本的離體時的狀態(tài)，必須保存在-135度玻璃化溫度以下，只有在此溫度以下，生物分子的微觀移動才會完全停止，達到“時間停止運行”的狀態(tài)，所以對生物活性要求最高的臍帶血、精子和細胞保存都是保存于-135度以下的溫區(qū)。

　　2、能達到玻璃化溫度以下的存儲方式有哪些?

　　在低溫生物學(xué)的推動下，出現(xiàn)了幾種能達到玻璃化溫度以下的存儲方式，各有其優(yōu)缺點，下面逐一討論：

　　A. 機械制冷冰箱：采用類似于-80度冰箱的原理，但使用了不同的冷媒以實現(xiàn)更低的溫度，最低可達到-150度。

　　–優(yōu)點：保留了冰柜的方形結(jié)構(gòu)，可以最大化利用空間，同時插電即可使用，用戶體驗比較方便

　　–缺點：溫度波動大，且距離玻璃化溫度過近(差15度)，在操作中極易發(fā)生樣本凍融和失效；且功耗大，故障率較-80度冰箱要高；

　　B. 液氮罐：使用高真空絕熱容器，內(nèi)容器充滿液氮，將樣本浸泡于液氮里

　　–優(yōu)點：液氮的沸點為-196度，故而能確保只要有液氮，樣本溫度都在-196度，溫度均一；

　　–缺點：由于液氮的流動性和蒸發(fā)性，帶來了樣本交叉污染和凍存管爆管的問題；另外液氮供應(yīng)在偏遠地區(qū)及市中心都比較困難，而中小型庫使用移動式補給罐也存在安全風(fēng)險；

　　C. 氣相液氮罐：使用高真空絕熱容器，內(nèi)容器底部存放液氮，通過液氮蒸發(fā)形成的對流進行降溫

　　–優(yōu)點：既能保證良好的溫度均一性(-180度至-190度)，又解決了液相罐的交叉污染和爆管問題；

　　–缺點：液氮供應(yīng)在偏遠地區(qū)及市中心都比較困難，而中小型庫使用移動式補給罐也存在安全風(fēng)險；

　　D. 復(fù)合制冷液氮冰箱：使用斯特林制冷機和液氮冷媒，將液氮蒸發(fā)后的氣體通過冷頭冷凝后回流

　　–優(yōu)點：實現(xiàn)了插電式使用的便利性和在液氮溫區(qū)的樣本安全性，而免去了液氮補給的困擾；

　　缺點：由于結(jié)構(gòu)較普通的液氮罐更為復(fù)雜，成本相對比較高；

　　3、是不是只要樣本保存在玻璃化溫度以下就能保證在取用時能再現(xiàn)樣本活性?

　　再現(xiàn)樣本活性不僅取決于樣本的存儲溫度，當(dāng)樣本離體開始到最終樣本取用，整個過程涉及一系列的操作流程，不同的冷凍劑有不同的降溫速率和模式，而一旦達到存儲溫度后，必須保證溫度的穩(wěn)定性，避免出現(xiàn)升溫。而從樣本降溫到取出往往面臨各種升溫場景，當(dāng)一個凍存盒從-180度環(huán)境中被取出時，盒內(nèi)的凍存管溫度在一分鐘內(nèi)溫度可能上升30-50度，從而造成一次解凍傷害。

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