我國擁有長(zhǎng)期使用中藥和中藥制劑的歷史，中藥一直未能得以飛速發(fā)展的主要原因是缺乏科學(xué)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。如今，對(duì)中藥的質(zhì)量控制僅局限于外觀檢查是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。隨著新技術(shù)的發(fā)展，研究人員已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些中藥中有幾百種化合物，其濃度范圍很寬，而且由于產(chǎn)地和采摘時(shí)期不同，以及炮制和加工工藝不同，中草藥的成分也各不相同。因此，對(duì)中藥化合物的質(zhì)量控制極具挑戰(zhàn)性。由于特殊配方的中藥制劑通常是由多種中藥組成，因此只測(cè)定中藥制劑中一兩種成分進(jìn)行質(zhì)量控制已無法滿足要求。例如用于治療冠心病的中成藥芪參益氣滴丸，就包含黃芪、丹參、三七和降香4種中藥。

本研究以芪參益氣滴丸為樣品，用高分離度快速液相色譜(RRLC)-紫外-可見檢測(cè)器和質(zhì)譜聯(lián)用，建立中藥質(zhì)量控制的新方法。主要目標(biāo)是建立一種可靠的方法，能夠選測(cè)定在加熱和混合過程中不變的潛在目標(biāo)化合物。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 1200系列RRLC系統(tǒng)包括：帶真空脫氣機(jī)的SL型二元泵、SL型高性能自動(dòng)進(jìn)樣器、配置微量流通池(2μl體積，3mm光程)的SL型柱溫箱和二極管陣列檢測(cè)器SL;

Agilent 6410四極桿質(zhì)譜儀，配置ESI離子源;

Agilent 化學(xué)工作站B.02.01SR，用于數(shù)據(jù)采集和分析;

Agilent ZORBAX XDB C18 RRHT色譜柱，3.0×50mm, 1.8μm粒徑。

標(biāo)準(zhǔn)品

丹酚酸B、丹參酮I、丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參素、三七皂甙R1和黃芪甲苷均購自中國藥品生物制品檢定所(NICPBP)，人參皂甙Rg1、人參皂甙Rb1、原兒茶醛、原兒茶酸、人參皂甙Re和人參皂甙Rc 購自Sigma-Aldrich公司(美國)。

溶劑

乙腈購自Fisher公司(美國)，水由Milli-Q純水系統(tǒng)制備。

樣品和樣品制備

芪參益氣滴丸、黃芪、丹參、三七的中間提取物，及降香精油，由中國TASLY制藥公司提供。原藥材購自當(dāng)?shù)刂兴幍?。滴丸、中藥提取物和中藥原料溶?0%甲醇/水溶液中，超聲提取30min，用0.22μm濾膜過濾。

RRLC方法

流動(dòng)相A：0.1%甲酸水;流動(dòng)相B：乙腈，含0.1%甲酸;

梯度：0min，10%B;8min，38%B;12min，100%B;持續(xù)3min，然后10%B;

流速： 1.0ml/min(被動(dòng)分流器將進(jìn)入MS的流速降至0.4ml/min);

柱溫：45℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm;峰寬：0.5s;狹縫寬度：4nm;光譜：190~400 nm，2nm步進(jìn)。

質(zhì)譜方法

掃描：80~1400(正/負(fù));碰撞誘導(dǎo)解離電壓：70(正/負(fù));干燥氣體：12L/min;

霧化器壓力：50psi;干燥氣溫度：50℃;毛細(xì)管電壓：3200 V(正/負(fù))。

結(jié)果與討論

用安捷倫方法轉(zhuǎn)換計(jì)算器(光盤發(fā)行號(hào)5989-5130EN)將常規(guī)液相色譜方法轉(zhuǎn)換成高分離度快速液相色譜方法。

丹參三七黃芪和降香提取物的比較

由圖1可見，在203nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，丹參和三七的色譜圖與混合提取物有很大區(qū)別?；旌虾图訜岷螅承┓逑Я?，同時(shí)出現(xiàn)了一些新的色譜峰。目標(biāo)化合物篩選是質(zhì)量控制的重要步驟，可以確定加工過程中這些化合物是否發(fā)生了變化。大多數(shù)研究者都用203 nm進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)橹饕钚曰衔锸窃磉?，?03 nm波長(zhǎng)下有弱吸收。但203 nm處的大峰可能與質(zhì)量控制無關(guān)，那些小峰可能對(duì)研究活性成分更重要。因此，需要另一種靈敏度更高的檢測(cè)器，提供這些成分的更多信息。

圖1. 各中藥丹參、三七及混合提取物的色譜圖。

不同檢測(cè)器和條件之間的比較

圖2顯示了紫外和MS檢測(cè)的不同結(jié)果。

在MS的總離子色譜圖中有更多的峰，因?yàn)槟承┏煞肿贤馕蘸苋趸蛘邲]有吸收。用MS檢測(cè)增加了另一維數(shù)據(jù)，并得到了這些不同化合物的結(jié)構(gòu)信息。負(fù)離子模式給出了這些峰更完整的信息，可以對(duì)質(zhì)量控制的目標(biāo)化合物進(jìn)行鑒定。

芪參益氣滴丸和不同提取物之間的比較

圖3顯示了丹參、黃芪和降香提取物與芪參益氣滴丸(由這3種提取物和其它填加劑制成)的色譜圖。標(biāo)記數(shù)字的峰就是對(duì)這一中藥制劑質(zhì)量控制篩選到的目標(biāo)化合物。根據(jù)UV和MS數(shù)據(jù)，研究不同的色譜峰，以確定這些化合物是否發(fā)生了改變，,鑒別結(jié)果如表1所示。

圖3. 三種中藥組合及滴丸樣品的負(fù)離子TIC比較。

表1. 目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)式和檢測(cè)信息

小結(jié)

本文介紹的RRLC紫外和MS檢測(cè)方法可根據(jù)UV和MS檢測(cè)器提供的信息跟蹤中藥中幾種成分的質(zhì)量，因此較目前藥典控制單一組分的質(zhì)控法更為可靠。由于中藥中的成分可能在炮制和加工過程中發(fā)生變化，因此對(duì)其的跟蹤非常重要。