低溫，哪些稱作生物和醫(yī)藥學(xué)上的低溫。生物和醫(yī)藥學(xué)上的低溫，是個(gè)較為寬的溫度范疇。從大部分酶的適宜反映溫度37℃下列到好多個(gè)K（開爾文），能夠稱之為低溫（絕對(duì)零度為-273.15℃ 即0K）。文中從樣品儲(chǔ)存的視角，將小于常溫下（室內(nèi)溫度，25℃上下）的溫度了解為低溫。低溫能抑止植物體的生物化學(xué)主題活動(dòng)，它是大自然具有的物理學(xué)規(guī)律性。依據(jù)阿侖尼烏斯（Arrhenius）式子，溫度越低，放熱反應(yīng)速率變慢，樣品的儲(chǔ)存時(shí)間越長(zhǎng)。因而，以便使微生物樣品在必須的時(shí)間內(nèi)長(zhǎng)期保持，大家按不一樣要求將樣品儲(chǔ)存在4℃，-20℃，-80℃ 或溫度更低的電冰箱中，或是儲(chǔ)存在液態(tài)氮中。文中談一談微生物樣品低溫儲(chǔ)存特別是在是凍存時(shí)必須留意的某些難題。

　　1. 長(zhǎng)期性儲(chǔ)存的機(jī)構(gòu)樣品要盡早凍存

　　樣品存貯的溫度對(duì)合理儲(chǔ)存時(shí)間的危害挺大。挑選適合的存貯方法和存貯溫度很關(guān)鍵。但為了確保試驗(yàn)結(jié)果的普遍性，學(xué)術(shù)研究還要充足留意樣品在存貯或固定不動(dòng)前的處理時(shí)間和方法。樣品從剛開始感受到固定不動(dòng)或低溫儲(chǔ)存前這一段時(shí)間，仍有某些生物化學(xué)全過程在迅速地開展。這種生物化學(xué)反映的速率直至樣品被固定不動(dòng)或是低溫儲(chǔ)存時(shí)才明顯減少。這過段時(shí)間越少越高。針對(duì)手術(shù)治療摘除的機(jī)構(gòu)，熱缺血性（warm ischemia）時(shí)間越少越高；針對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，處決抽樣時(shí)掙脫時(shí)間越少越高。這有利于避免因自然環(huán)境更改而造成基因的表達(dá)水準(zhǔn)或蛋白質(zhì)磷酸化情況造成很大轉(zhuǎn)變。某些較繁雜的手術(shù)治療將會(huì)開展幾小時(shí)乃至一天到晚，那麼最開始被激光切割但未被切離的那一部分機(jī)構(gòu)將會(huì)親身經(jīng)歷較長(zhǎng)的熱缺血性時(shí)間，可能會(huì)導(dǎo)致很大的生物化學(xué)轉(zhuǎn)變。以便盡量減少熱缺血性的危害，某些診室專業(yè)置放了液氮容器，機(jī)構(gòu)如果切下來(lái)就被資金投入液態(tài)氮開展急凍（snap freezing）；針對(duì)用時(shí)較長(zhǎng)的手術(shù)治療，許多人先往短期內(nèi)內(nèi)切下來(lái)有象征性的小一部分機(jī)構(gòu)用以科學(xué)研究，隨后再開展用時(shí)較長(zhǎng)的摘除；許多人在標(biāo)準(zhǔn)不足時(shí)，選用了將熱缺血性情況變?yōu)槔淙毖裕╟old ischemia ）情況的方法降低樣品的轉(zhuǎn)變。她們先把切下來(lái)的機(jī)構(gòu)放置雪上或4℃ 電冰箱中置放短期內(nèi)，便捷時(shí)再將樣品放置-80 ℃電冰箱或液態(tài)氮儲(chǔ)存。換句話說，從樣品剛開始收集到被凍存或固定不動(dòng)，這一段時(shí)間越少越高，通常不必超出20分鐘?；蛟S不一樣機(jī)構(gòu)生物化學(xué)全過程的轉(zhuǎn)變速度有區(qū)分。當(dāng)機(jī)構(gòu)趕不及凍存時(shí)，可將其裁成一塊塊，放在機(jī)構(gòu)儲(chǔ)存液如RNAsafety?中。

　　2. 樣品凍存的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)

　　對(duì)比于FFPE樣品，凍存機(jī)構(gòu)的DNA 和RNA的得率高，片斷長(zhǎng)，性價(jià)比高?？捎靡曰蛐酒腿聹y(cè)序等高通量基因組學(xué)檢驗(yàn)。有別于FFPE樣品，凍存機(jī)構(gòu)內(nèi)的蛋白（如酶類）依然維持微生物特異性，可用以一些檢驗(yàn)。但對(duì)凍存樣品，必須留意某些難題。凍存機(jī)構(gòu)的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)際效果有時(shí)候比不上FFPE樣品細(xì)致、極致（比如用以免疫力組織化學(xué)檢驗(yàn)時(shí)）；一些病理學(xué)機(jī)構(gòu)內(nèi)的某些傳染性系數(shù)凍存后依然維持特異性，解決這種樣品時(shí)必須分外留意；機(jī)構(gòu)樣品中的RNA在-80℃ 凍存時(shí)依然并不是長(zhǎng)期性平穩(wěn)的，許多人觀查到5年之后RNA出現(xiàn)溶解；核苷酸、蛋白等生物大分子歷經(jīng)不斷凍融循環(huán)，有將會(huì)破裂成較小片斷；凍存能耗較多，必須較多專業(yè)的室內(nèi)空間，成本費(fèi)昂貴；當(dāng)凍存機(jī)器設(shè)備產(chǎn)生常見故障時(shí)，大量寶貴的樣品有將會(huì)被毀壞，可能會(huì)導(dǎo)致極大的損害；若用液態(tài)氮凍存樣品時(shí)，也要預(yù)防凍傷、液氮容器發(fā)生爆炸及因室內(nèi)空間密閉式等造成室息等風(fēng)險(xiǎn)性。

　　3. 凍存溫度的挑選

　　前已述及，依據(jù)通常的物理學(xué)規(guī)律性，溫度越低，樣品的平穩(wěn)時(shí)間越長(zhǎng)。在超低溫冰箱問世以前，-20℃ 電冰箱是常見的低溫存貯專用工具其一。實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，-20℃ 時(shí)機(jī)構(gòu)內(nèi)的生物大分子依然能夠被溶解。并且，0至-60℃ 是水的結(jié)晶體溫度。結(jié)晶體非常容易對(duì)體細(xì)胞和機(jī)構(gòu)的外部經(jīng)濟(jì)構(gòu)造導(dǎo)致?lián)p害，通常沒有這一溫度范疇來(lái)儲(chǔ)存機(jī)構(gòu)和體細(xì)胞。某些歷經(jīng)純化的生物大分子能夠在這里一溫度范圍之內(nèi)短期內(nèi)儲(chǔ)存?，F(xiàn)階段，大部分微生物和醫(yī)學(xué)臨床研究組織用-80℃ 電冰箱或液態(tài)氮凍存微生物樣品。-80℃小于不良影響很大的結(jié)晶體溫度范疇，都是常見機(jī)器設(shè)備超低溫冰箱能超過的溫度。但在-80℃溫度下，不一樣的微生物樣品的儲(chǔ)存時(shí)間不相同的。機(jī)構(gòu)中的DNA能夠在-80℃下能夠維持多年或更長(zhǎng)期。機(jī)構(gòu)中的RNA在-80℃下的可靠性隨不一樣機(jī)構(gòu)或體細(xì)胞而異，但通常不超出5年。

　　微生物樣品的低溫儲(chǔ)存，是現(xiàn)階段微生物樣品的關(guān)鍵儲(chǔ)存方法。在哪兒一溫度下開展儲(chǔ)存，必須融合樣品自身的特性及試驗(yàn)?zāi)康貋?lái)明確。通常情況下，機(jī)構(gòu)樣品內(nèi)的生物大分子比提純后的生物大分子不平穩(wěn)，RNA比DNA容易溶解。機(jī)構(gòu)樣品、體細(xì)胞樣品的快速收集、快速凍存或固定不動(dòng)針對(duì)儲(chǔ)存生物大分子的一致性很關(guān)鍵。在開展樣品的低溫儲(chǔ)存時(shí)，加上微生物樣品儲(chǔ)存液，比如RNAsafety?系列產(chǎn)品有機(jī)化學(xué)保護(hù)膜，能夠協(xié)助減緩生物大分子的溶解系統(tǒng)進(jìn)程，獲得比較理想的科學(xué)研究結(jié)果。

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