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ZenoTOF? 7600系統(tǒng):揭開脂質(zhì)結(jié)構(gòu)神秘面紗,提供組學(xué)新視角

2022.2.17

代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)已越來越成為生命科學(xué)研究的關(guān)鍵手段,然而脂質(zhì)分子的精準(zhǔn)結(jié)構(gòu)闡釋、低豐度代謝物的準(zhǔn)確定性和定量,依然存在挑戰(zhàn)。

以花生四烯酸為例,其學(xué)名為二十碳四烯酸,屬Omega6族長(zhǎng)鏈多元不飽和脂肪酸,這種具有四個(gè)雙鍵的20碳脂肪酸于1909年由 Percival Hartley 從哺乳動(dòng)物組織中首次被分離并鑒定出來。這是在色譜法或任何光譜方法(MS、紅外、UV 或 NMR)出現(xiàn)之前完成的。1913年,根據(jù)其與眾所周知的花生酸 (C20:0) 的關(guān)系,提出了花生四烯酸這一名稱。直到 1940 年,四個(gè)雙鍵的位置才被定義為 20 個(gè)碳鏈的 5,8,11,14。1961 年報(bào)道了全合成,最后,雙鍵的構(gòu)型被確認(rèn)為all cis-5,8,11,14?;ㄉ南┧岬慕Y(jié)構(gòu)確證歷經(jīng)約50年,幾代研究者從碳鏈的長(zhǎng)度,雙鍵的位置,化學(xué)合成等方面對(duì)花生四烯酸進(jìn)行了完整的研究。其中四個(gè)雙鍵的位置經(jīng)歷了幾位科學(xué)家共同努力才得以確證,其艱難曲折的過程證明了確定雙鍵位置是一個(gè)重大的難題和挑戰(zhàn)。假如當(dāng)時(shí)有質(zhì)譜技術(shù)這些研究將變得簡(jiǎn)單,SCIEX ZenoTOF? 7600系統(tǒng)電子活化解離(EAD)技術(shù)可以在一次實(shí)驗(yàn)中完成脂質(zhì)的完整表征,包括鑒定脂質(zhì)的端基、區(qū)域異構(gòu)、順/反異構(gòu)、骨架、雙鍵等,提供脂質(zhì)組學(xué)深度研究的精確視角,同時(shí)Zeno? Trap(Zeno 阱)功能使發(fā)現(xiàn)更低含量的代謝物成為可能。

?ZenoTOF? 7600系統(tǒng)的電子活化解離技術(shù)用于甘油三酯化合物的深度研究

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質(zhì)譜作為脂質(zhì)組學(xué)最重要的研究手段之一,在脂質(zhì)雙鍵異構(gòu)體的鑒定方面卻面臨著極大的挑戰(zhàn)。這主要是因?yàn)樵趥鹘y(tǒng)的脂質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析中,所采用的碰撞誘導(dǎo)解離技術(shù) (CID),無法使目標(biāo)物在C=C鍵處斷裂產(chǎn)生與其位置相關(guān)的特征離子。ZenoTOF? 7600系統(tǒng)的電子活化解離技術(shù) (EAD) 可以在單鍵處斷裂,雙鍵處不斷裂,直觀的幫助我們判斷出雙鍵位置,同時(shí)這種碎裂模式得到豐度的碎片信息,獲得更多脂質(zhì)結(jié)構(gòu)診斷信息,可以判斷脂質(zhì)類別,每條脂肪酸鏈信息和雙鍵位置,很適用于脂質(zhì)化合物和脂質(zhì)組學(xué)的深度研究。本文使用ZenoTOF? 7600系統(tǒng)對(duì)甘油三酯類化合物進(jìn)行深度結(jié)構(gòu)解析,一針進(jìn)樣即可快速得到頭基、特征診斷離子、脂肪酸鏈和雙鍵位置信息,鑒定甘油三酯化合物。

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SCIEX ZenoTOF? 7600系統(tǒng)的電子活化解離技術(shù)用于脂質(zhì)化合物的深度研究

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本文使用ZenoTOF? 7600系統(tǒng)的電子活化解離技術(shù)對(duì)脂質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,方法具有以下特點(diǎn):

1.可以一針進(jìn)樣得到脂質(zhì)豐富的碎片信息,可以得到頭部基團(tuán)、脂質(zhì)骨架、特征診斷離子、脂肪酸鏈和雙鍵位置信息,準(zhǔn)確的鑒定出脂質(zhì)化合物。

2.對(duì)于CID技術(shù)得到的頭部基團(tuán)信息一致,需要耗時(shí)去區(qū)分的兩大類脂質(zhì)磷脂酰膽堿(PC)和鞘磷脂(SM),可以直接通過EAD技術(shù)得到的二級(jí)質(zhì)譜圖判斷。

3.可優(yōu)化的電子動(dòng)能(Electron KE)和電子流(Electron beam current)可以得到更豐富和質(zhì)量好的二級(jí)碎片,Zeno? trap的阱集功能可以使得即使很低的碎片依舊可以得到,更準(zhǔn)確的判斷化合物結(jié)構(gòu)。

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SCIEX ZenoTOF? 7600系統(tǒng)Zeno Trap功能在代謝組學(xué)分析中的應(yīng)用

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Zeno Trap在代謝組學(xué)中的應(yīng)用特點(diǎn):

1.定量實(shí)驗(yàn),提高M(jìn)RMHR(高分辨多重反應(yīng)監(jiān)測(cè))定量靈敏度;

2.定性實(shí)驗(yàn),提高數(shù)據(jù)庫(kù)匹配的置信度;特別是對(duì)低含量化合物,也能獲得優(yōu)異的數(shù)據(jù)庫(kù)匹配;

3.大隊(duì)列實(shí)驗(yàn)中,配合130 Hz (5 ms/ scan)快速掃描速度,保證化合物的覆蓋率和MS/MS譜圖質(zhì)量的前提下,至少可以縮減一半的樣品運(yùn)行時(shí)間。

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參考文獻(xiàn):

Martin, Sarah A., Alan R. Brash, and Robert C. Murphy. "The discovery and early structural studies of arachidonic acid." Journal of lipid research 57.7 (2016): 1126-1132.


SCIEX 2021年度高分辨質(zhì)譜新品ZenoTOF? 7600 系統(tǒng),榮獲“2021 ANTOP最受好評(píng)的多重碎裂高分辨質(zhì)譜創(chuàng)新獎(jiǎng)”


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高分辨質(zhì)譜ZenoTOF? 7600系統(tǒng)

Zeno trap和EAD作為 MS/MS 靈敏度和碎裂技術(shù)的階段性飛躍的強(qiáng)大組合。?它們共同提供了獲取所需的關(guān)鍵 MS/MS 信息的能力:表征大分子,包括翻譯后修飾;闡明小分子和脂質(zhì)的位置異構(gòu)體。ZenoTOF? 7600系統(tǒng)的主要性能突破:改善QTOF MS/MS 占空比問題

? ? ??>90% 的離子注入 TOF

? ? ??使用 Zeno trap技術(shù)可將靈敏度提高約?5-20 倍

? ? ??鑒定和定量低豐度離子

所有分子類型的可調(diào)碎裂

? ? 采用可控能量的電子活化解離 (EAD)

MS/MS 掃描速率高達(dá)133 Hz

? ? 改進(jìn)的 數(shù)據(jù)依賴型采集DDA 和高分辨率 MRMHR

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